熒光PCR實驗的關(guān)鍵步驟

發(fā)布時間：2020-07-16 點擊次數(shù)：2416次

熒光定量PCR實驗時所需的耗材有八連管，光學(xué)級八連管蓋子，光學(xué)級96孔板封膜，96孔板等。熒光定量PCR實驗過程分為RAN的提取，反轉(zhuǎn)錄, 熒光定量PCR反應(yīng), 數(shù)據(jù)分析。做熒光定量PCR實驗有幾個關(guān)鍵步驟需要注意1.應(yīng)有合適數(shù)目的生物學(xué)重復(fù)及正確的對照樣品設(shè)置2.樣品的獲得應(yīng)按照實驗流程中對采樣，處理和保存的要求及確保重復(fù)性并減小重復(fù)樣品間的標(biāo)準(zhǔn)偏差。3對RAN的純度和完整性進行質(zhì)量控制。4.將總RAN反轉(zhuǎn)錄成cDNA的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。5.試驗中正確的引物設(shè)計，引物退火溫度確定，基因擴增效率摸索。6.實驗數(shù)據(jù)分析中內(nèi)參基因選擇和統(tǒng)計方法計算。在做熒光定量PCR實驗過程中凍干工藝優(yōu)化也起著重要作用。需要選擇適合的凍干機，如Pilot10-15EP解決用戶對凍干曲線不熟練的問題,縮短研發(fā)、小試周期, 提高凍干產(chǎn)品的一致性,解決用戶在應(yīng)用當(dāng)中的技術(shù)問題。

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